为最大限度降低交叉反应，本山羊抗兔IgG(H+L)完整二抗已通过亲和纯化，并针对人IgG、人血清、小鼠IgG、小鼠血清及牛血清进行交叉吸附处理。交叉吸附（或称预吸附）是一种纯化步骤，可显著提高抗体特异性，从而获得更高检测灵敏度及更低背景染色。该技术是将二抗溶液通过含有潜在交叉反应物种固定化血清蛋白的层析柱，仅非特异性结合的二抗会被截留，而高特异性二抗则顺利通过。这一纯化步骤的优势在多色标记实验（如流式细胞术）中尤为明显，可有效避免与其他一抗的潜在交叉反应；同时在组织/细胞荧光染色实验中，能显著降低内源性免疫球蛋白的干扰。

Alexa Fluor染料是当前最值得信赖的荧光染料之一。Alexa Fluor 647染料是一种近红外荧光染料，其激发光谱与647 nm激光线完美匹配。该染料在成像和流式检测中能产生稳定信号，且在较宽摩尔浓度范围内不受pH值影响。凭借高荧光量子产率和优异的光稳定性，可实现对低丰度生物结构的高灵敏度检测。Alexa Fluor 647染料能以高摩尔比与蛋白结合而不产生明显自淬灭效应，从而获得更高亮度的偶联物，实现更灵敏的检测效果。通常每个IgG分子可偶联2-8个荧光基团。

使用前，请对蛋白偶联物溶液进行短暂离心，仅取上清液用于实验。该步骤可有效去除储存过程中可能形成的蛋白聚集体，从而降低非特异性背景染色。由于不同实验的染色方案存在差异，建议通过预实验确定最佳抗体稀释度。对于荧光标记抗体，在大多数免疫组化和流式细胞术应用中，1-10 µg/mL的终浓度均可获得理想效果。