有 ATP 存在时，T4 DNA 连接酶在双链 DNA 的 3´羟基和 5´磷酸末端之间形成磷酸二酯键。 独特的 T4 DNA 连接酶缓冲液优化了连接过程，5 分钟内即可完成连接 (1)。 单链核酸不是这种酶的底物。 提供 T4 DNA 连接酶技术公告。

应用： 克隆（平末端或粘末端连接）(2)。 向平末端 DNA 添加连接头或接头 (2)。

来源： 纯化自大肠杆菌œ溶素原 NM989。

性能和质量测试： 脱氧核糖核酸内切酶，3´ 和 5´ 脱氧核糖核酸外切酶实验；通过连接效率测试。

单位定义： 一个单位的酶量可以在 37°C 的环境中在 20 分钟内催化 1 nmol ³²P-标记焦磷酸通过置换反应进入 ATP。（一个单位等于约 300 粘末端连接单位。）

单位反应条件： 66 mM Tris-HCl (pH 7.6)，6.6 mM MgCl₂，10 mM DTT，66 μM ATP，3.3 μM 32 P-标记焦磷酸及酶，共 0.1 ml，在 37°C 反应 20分钟。